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                TArget Clone™-Plus-

                用途

                ●普通的TA克隆「TArget CloneTM
                ●KOD系列擴增得到的平滑末端產物的TA克隆「TArget CloneTM-Plus-」
                ●對KOD系列擴增得到的平滑末端產物進行加dA反應「10×A-attachment Mix」

                說明

                本品是高效率TA克隆試劑盒。Taq系列酶擴增的PCR產物及KOD系列酶擴增的平滑末端PCR產物均可直接進行TA克隆。Taq、Tth DNA polymerase、Blend Taq®、KOD Dash等酶的擴增產物的3'末端通常帶有dA,可直接與T載體連接(→使用TArget CloneTM)。
                另外,KOD系列(KOD -Plus-系列以及KOD FX系列)的PCR產物的3'末端基本已被平滑化,PCR產物不能直接進行TA克隆。為了使擴增產物能夠進行TA克隆,可使用TArget CloneTM -Plus-,用10×A-attachment Mix在平滑末端添加堿基(主要是dA)。
                10×A-attachment Mix中含有對末端添加堿基的Taq DNA polymerase和用來中和反應后殘留的KOD的3'→5'Exonuclease活性(校正活性)的抗KOD抗體。


                特征

                ●快速?高效率
                連接反應最快可在5分鐘內完成。

                可靠
                載體中有LacZ,可進行藍白斑篩選。

                方便
                在多克隆位點的兩端帶有轉錄用的啟動子(T7、T3),可用于轉錄產物的配制。

                可用于平滑末端PCR產物《TArget Clone -Plus-》
                在TA克隆試劑盒中添附了『A-attachment Mix』,使用更方便,是KOD系列專用的TA克隆試劑盒。平滑末端PCR產物無需純化,將其與『A-attachment Mix』混合,只需10分鐘即可完成加dA反應。

                實驗例

                使用各類PCR產物比較TA克隆的效率用高保真性酶KOD -Plus-、KOD -Plus- ver.2及Blend Taq,對來自human genome的β-globin基因0.5kb進行PCR擴增。分別用TArget Clone以及TArget CloneTM -Plus-對未經純化的PCR產物進行TA克隆,連接到pTA2 載體。結果可見,對KOD -Plus-、KOD -Plus- ver.2的擴增產物進行克隆時,使用TArget CloneTM -Plus-,克隆效率可得到大幅度提高。

                另一方面對Blend Taq的擴增產物進行克隆時,用TArget CloneTM -Plus-相比,雖然效率有很大下降,但是使用TArget Clone也可以高效率地進行TA克隆。

                【TAK-101】
                pTA2 Vector(50ng/μl) 10μl
                2×Ligation Buffer 50μl
                T4 DNA Ligase 10μl
                【TAK-201】
                pTA2 Vector(50ng/μl) 10μl
                2×Ligation Buffer 50μl
                T4 DNA Ligase 10μl
                10×A-attachment Mix 10μl 

                基本反應條件

                「TArget Clone」TM

                滅菌蒸餾水(3-X)μl

                2×Ligation Buffer 5μl

                pTA2 Vector (50ng/μl) 1μl

                PCR產物Xμl

                T4 DNA Ligase 1μl

                Total Volume 10μl

                室溫(15~25℃)、30min.

                「TArget CloneTM -Plus-」

                KOD酶擴增的PCR產物 9μl

                10×A-attachment Mix 1μl

                Total Volume 10μl

                60℃、10min.

                滅菌蒸餾水(3-X)μl

                2×Ligation Buffer 5μl

                pTA2 Vector (50ng/μl) 1μl

                上述處理后的PCR產物Xμl

                T4 DNA Ligase 1μl

                Total Volume 10μl

                室溫(15~25℃)、30min.

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